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PCR实验室核酸检测常见六大问题

时间 : 2022-06-01 16:30:02 阅读 : 25

①新冠试剂出现翘尾,怎么处理?

答:如果是个别单一通道翘尾,不管是FAM还是VIC通道,首先按照要求复查,复查建议重新采样,如果不方便重新采样建议对原有样本进行重新提取核酸验证,如果复查阴性判读阴性,如果复查还是同一通道翘尾,就要对结果仔细审核,一是要排除实验室污染,二是要对病人信息了解清楚,从临床症状及接触史排查,如果没法确认,建议必须重新采样复查,如有必要可以采用另一家试剂来验证。如果出现大量的弱阳性扩增翘尾,首要原因是考虑实验室污染,可以通过做环境样本和阴性对照做验证排除。


②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因吗,灵敏度哪个更高?是否会和其他冠状病毒片段重叠?

答:N基因跟1ab都是特异的,不会跟其他呼吸道病原体交叉反应。设计时候,两个基因的序列不一样,导致灵敏度不一样,N基因的灵敏度比1ab灵敏度高。


③新冠检测结果和临床诊断不符合,怎么解读?

答:新冠病毒由于是RNA病毒,容易降解,另外检测结果也和取样,核酸提取以及样本本身的核酸浓度有关,需要逐一分析,同时可以结合临床症状判读。


④采用生理盐水做阴性对照,内标也会增长,怎么解释?

答:因为试剂采用的是内源性内标,内源性内标是用人源基因标记,此基因存在于人的表皮细胞内,操作过程中就可能会出现人源性的污染,另外环境污染也有可能导致内标增长,这也是前面提到的建议做环境样本质控。


⑤新冠样本内标不出如何处理?

答:如果新冠样本内标不出,该样本必须复查,可重新混匀该样本提取核酸,如果重新提取该样本内标还是不出,在排除提取问题的情况下,说明采样不合格,要通知临床重新采样复查。


⑥采集环境样本检测新冠状病毒,为啥大部分样本内标不出,偶尔个别样本检测出内标?

答:因为新冠试剂检测的是人内源性内标,环境样本一般不含有人源细胞,所以检测不出内标;偶尔检出内标,可能该环境样本上有人源性细胞粘附,故而检出内标。


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标题:PCR实验室核酸检测常见六大问题
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